概述

法醫DNA案件分析實驗室常常遇到一定比例的富有挑戰性的樣品，很難成功檢測。而且，近年來送檢進行DNA分析的樣品大大擴展，覆蓋更廣的案件類型，包括侵財案件和輕微犯罪案件。因此，現在法醫實驗室必須處理更多的樣品，而這些樣品往往被一種或多種復雜因素所困擾（例如微量DNA、降解、新的或不熟悉的PCR抑制劑、以上兩個或更多的因素）。所有這些頗具挑戰性的情況會顯著影響分析人員獲得可信DNA圖譜的能力。許多實驗室為了從困難樣品中獲得更好的結果，盡量優化他們的工作流程。這些優化的方法包括對樣品進行稀釋或純化，在反應中加更多的酶，或者進行毛細管電泳條件的優化。成熟的磁珠提取方法的出現，比如PrepFiler?法醫DNA提取試劑盒，幫助提高了從法醫檢材中提取的DNA數量和質量，從而提高了下游結果的質量。盡管已經獲得了顯著進步，但實驗室還是需要更多的工具，來應對不斷擴張的復雜DNA樣本。AmpFlSTR? Identifiler? Plus PCR擴增試劑盒是特地為滿足法醫分析實驗室的需要而開發的。Identifiler? Plus試劑盒采用與廣泛使用的Identifiler?試劑盒相同的引物，利用新一代PCR擴增技術來獲得全新水平的性能、數據質量和效率。這幫助法醫分析人員更有信心地從富有挑戰性的樣品中得到更多信息。

提高對含抑制劑樣本的分析性能I d e n t i f i l e r ? P l u s 試劑盒對近期AmpFlSTR? 試劑盒（如MiniFiler?試劑盒）開發時所定的緩沖液配方進行了改進，目的是克服高水平的PCR抑制，并確保更穩定更高效的擴增。新的配方能從目前Identifiler?試劑盒無法分析的樣本中獲得結果（圖1）。靈敏度更高Identifiler? Plus試劑盒中的緩沖液和預混合液的改良可促進更穩定的擴增 —— 即使是那些不含PCR抑制劑的樣品也一樣。在無需增加PCR循環數或進樣次數的情況下，經過Identifiler? Plus試劑盒擴增的純化樣品所產生的峰高比用目前的Identifiler?試劑盒提高了40-100%（圖2）。此外，兩種不同循環數的步驟（28和29）的驗證讓實驗室可以調整適應常規DNA模板量樣本和微量DNA樣本。改善對混合物的分析性能Identifiler? Plus試劑盒的性能改善大大簡化了對混合物案件樣品的分析 —— 這些混合物中常含有PCR抑制劑，其中次要成分可能以極低的水平存在。Identifiler? Plus試劑盒具有更高的靈敏度，更好的克服PCR抑制的能力，同時雜合子的峰高均衡性和熒光顏色之間的平衡性也更好，使得分析人員能夠比以往更輕松更可靠地分析和解釋混合物樣本（圖3）。更干凈的基線Applied Biosystems對引物生產工藝進行了重大改進，并將這些改進融入Identifiler?Plus試劑盒中。這些改進生產出更純的引物，減少染料峰的產生，從而有助于得到更干凈的基線。這個特征讓分析人員能夠用最大的自信和效率來闡釋結果，包括那些從困難混合物中獲得的結果。其它改進和優勢試劑盒配方的改進還實現了更快速的擴增 —— 與目前的Identifiler?試劑盒相比，擴增步驟大約可節省1個小時。此外，Identifiler? Plus預混合液中含有AmpliTaqGold? DNA聚合酶，從試劑盒包裝上節省了2支試劑管和一個多余的包裝小盒，簡化了反應制備。Identifiler? Plus試劑盒中所包含的配方改進，均不需要對原Identifiler?試劑盒的等位基因ladder或5種染料配置進行修改。這種配置可實現最佳的基因座間隔，且擴增子的大小范圍不超過360 bp，與其他擴增子大小范圍明顯大得多的多重分析系統相比，能夠從降解的樣品中更好地獲得數據。對于嚴重降解的樣品，可采用專門設計的MiniFiler?試劑盒與Identifiler?Plus試劑盒聯合使用，利用miniSTR技術來幫助得到更多信息。此外，Identifiler? Plus試劑盒維持了原引物序列，確保與過去用Identifiler?、Identifiler? Direct、Profiler Plus?、Cofiler?或SGM Plus?試劑盒分型的樣品保持基因分型一致性，并保證了與現有DNA數據庫

進行比對。